點(diǎn)擊次數(shù)：18 發(fā)布時間：2011-5-28
核酸探針 Fitts（1983）等在沙門菌檢測中引入了*代DNA-RNA雜交技術(shù)，此法應(yīng)用的探針含有用放射性同位素標(biāo)記的傷寒沙門菌DNA片段，其敏感性高，經(jīng)大約48h的增菌步驟后，檢測極限可達(dá)l08個／ml，但由于要使用放射性同位素，只能在專門的實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行，因此阻礙了該方法的推廣應(yīng)用。第二代方法依賴于沙門菌核糖體RNA（rRNA）的檢測。核糖體是細(xì)胞蛋白質(zhì)合成器的一部分，每個細(xì)菌中存在5000～20000個復(fù)制體，而相比之下染色體DNA復(fù)制體僅2～10個。
這種天然富含rRNA標(biāo)靶序列的情況使得無輻射檢測成為可能，同時又保持了與放射性同位素方法相當(dāng) 或更高的敏感性。該方法的另一優(yōu)點(diǎn)是由于rRNA為單鏈，雜交前無需經(jīng)過變性步驟。要得到陽性結(jié)果，此法需要105個／ml（以靶細(xì)胞計(jì)）。對于沙門菌檢測來說，無論采取*代還是第二代檢測方法，都需要進(jìn)行預(yù)增菌和選擇性增菌，總共約50h。核酸探針法比ELISA法更耗時，但二者成本相近。檢測一種菌就需要制備一種探針，目前尚未建立所有致病性沙門菌的探針，無論是采用*代還是第二代檢測方法，要達(dá)到檢測量還要對樣品進(jìn)行預(yù)增菌和選擇性增菌，任何一種方法不可能有100％的特異性和敏感性，所以必須考慮假陽性和假陰性的問題。
AOACzui近認(rèn)可了Gene-Trak沙門菌比色分析法，探針的標(biāo)記物為異硫氰酸熒光素（FITC），再用辣根過氧化酶標(biāo)記抗FITC的抗體結(jié)合放大探針，在多聚腺苷酸尾部和多聚胸腺嘧啶侵染棒固相薄膜上雜交，對239株沙門菌的特異性檢出率為100％，假陽性率為0．8％。
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